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详细阐述IVF中的密度梯度离心法

发布日期:2017-08-10

好孕美宝介绍到,DGC法是基于精子密度选择精子。活力精子的密度高于无活力精子及死亡精子的密度。因此,可挑选出具有最佳形态且高活力的精子亚群。然而,DGC的回收率低仍是主要问题。DGC使用的WM是含HEPES缓冲液的人输卵管液(HTF)内含二氧化硅颗粒。由于精子的回收率较低,如果初始TMS<15X10,则不考虑采用DGC。经批准可用于人精子处理的商业化产品是PureSperm和Isolate。两者均可以购买100%的原液及45%和90%的工作液。美国试管婴儿服务机构好孕美宝介绍到,过去,Percoll广泛用于DGC,但现在未批准用于人类。

密度梯度离心法DGS,准备用100%的原液配置l0ml的90%Pure-Sperm(PS)或Isolate(IS)液,取lmlWM加人到9ml的100%PS或IS液即可。准备10ml的45%PS或IS液,取5ml上述制备的90%PS或IS液与5ml的WM混合即可。也可选择将4.5ml的PS或IS溶液加人到5mlWM中。液化后,将全部精液置于15ml离心管中。开始精液分析,包括计算TMS和制备精子形态学玻片。DGC所需的试管量根据精液量和精子浓度确定。如果输卵管灌注是按计划的,则用4ml的WM重悬精子。也可选择用0.5ml的WM重悬精子,在吸取0.5ml精子悬液前先吸取3.5ml的WM到IUI导管/注射器内。

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SWD是基于活力精子可利用重力确定方向的能力,引导自身向下游过黏度递增的人血清白蛋白(HSA)培养液,速度快于比无活性精子或碎片单纯依靠重力沉降的速度,游得最SWD是基于活力精子可利用重力确定方快的精子占据了最底层,而碎片和无活力或死亡的精子则留在顶部。美国试管婴儿服务机构好孕美宝介绍到,经SWD处理的精子能动性可达90%〜98%,进展级别从2.8提高到3.9,正常形态的比例也有所提高。

分离的完整性主要依赖于下列变量:精子浓度、动态活力、应用于每个液柱的总精子数及SWD开始到结束的时间间隔。SWD过程需要3小时,加上离心步骤,还需30分钟左右。精子回收率平均为45%,但范围是20%〜70%,主要是根据原始精子活力和进展情况而定。如果活力低于35%及进展级低于2.5,回收率将偏低。然而,当活力低或在可接受极限的35%〜45%内时,而且仅有少量的碎片存在的情况下,可允许增加10〜15分钟的SWD时间。如果精液标本含有大量碎片,HSA浓度需增加12.5%甚至15%。

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